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第9章 实验动物质量控制(6)

使用过的垫料是实验动物室固体废弃物中(包括垫料、动物排泄物、动物尸体、纸张及其他物品)数量最大的废弃物。废弃物的量涉及废弃物处理费用的高低,减少废弃物的量是解决废弃物污染问题的最佳途径,可依据最大动物饲养空间估算废弃垫料的生产量,以安排贮存空间、运送工具和人力。其次,废弃物清理、搬运、收集、贮存及处理应建立一套工作规范,一切操作按有关法令规定执行。

设置负压式废弃垫料收集装置,避免垫料在清理过程中随空气散布。工作人员穿戴防护装备,如工作眼罩、口罩、面罩、手套和长筒靴等。不同污染程度的废弃垫料,应以不同方式处理,一般性无害的废弃垫料,是指单纯动物实验所清除出来的垫料,可直接进行最终处理,常用方法包括堆肥和苗圃处理、焚烧、经下水道排放或视作一般废弃物掩埋。以焚烧的方式处理废弃垫料符合环保要求但花费高,经下水道排放,每年定期处理窨井中沉淀下的污泥,处理的方法是按窨井容积加入5%生石灰,搅拌作用24小时后,用污泥泵将污泥抽入贮槽车中,运到农田喷洒之,以做肥料。废弃垫料以掩埋方式处理,需注意的是有传染性或放射性物质污染的垫料、感染性废弃垫料经灭菌后方可当无害性废弃垫料予以掩埋。感染性废弃垫料要包装密封于印有生物危害标志的塑胶袋中,贮存在独立场所不得超过一日,最好当日换出的垫料当日灭菌送出,并用焚烧方式处理。在清理时要注意避免气溶胶形成,工作人员要配备防护用具。放射性废弃垫料要以印有黄色放射性物质标志的塑胶袋包装,于特定的容器中暂时贮存,待容器装满后由专门人员收集处理。在清理过程中避免产生气溶胶,工作人员需穿戴防护装备。

废弃物应定期清理,不做长期贮存,动物房舍亦应设有足够的贮存空间,贮存暂时无法立刻处理的废弃物。废弃物贮存区与其他区室分隔,尽量远离动物饲养区、人员休息区或场内主要运输线。废弃物贮存室必须密闭,避免臭气外泄和防止苍蝇、蟑螂、啮齿类动物侵入,废弃物除以塑胶袋密封外,应以贮存桶盛载,避免搬运中泄漏、渗出、逸散、飞扬、散发恶臭,盛载废弃物容器应选择金属或塑胶材料,坚固耐磨,贮存容器及设施应经常清洗保持清洁。

生物性废弃物需冷藏以免分解腐败。

废弃物的传送、清运,时间上应避开动物设施繁忙时间,一般而言可选择在上午或下午某一固定时间,每天清运1次。运送废弃物的手推车四周应设藩篱围封,清运过程要防止泄漏、翻倒等意外事件发生,清运人员应穿戴连身的塑胶衣服、胶靴及手套。

119.实验动物设施的卫生管理有哪些要求?

在实验动物的管理工作中,卫生、消毒与灭菌所占工作量最大,因为,实验动物饲养不同于普通养殖业,它有一个高的卫生标准,以保护工作人员和动物本身免遭微生物感染。

卫生管理大致有如下内容。

(1)环境卫生管理:结合植树绿化场区,种植花草,填平水坑,清除污物、垃圾,消灭蚊、蝇滋生地。特别注意肥料堆积处、焚尸炉、化尸池周围,饲料加工车间周围的卫生。经常宣传保持环境卫生,禁止随地丢弃污物,禁止随地吐痰。

(2)动物室内的卫生管理:实验动物笼架应当和墙壁保持一定距离,尤其是墙角处,以免造成死角,妨碍打扫卫生,要定期或勤清除墙壁、四角的浮尘及异物;定期用0.1%新洁尔灭或1∶1000消毒灵喷洒墙壁与地面。中、大型实验动物室内应每天用高压水龙头冲洗厩地板,清除粪尿;铺垫草的厩、窝,应勤换垫草,至少每周将整个垫草全部清出1次,用水仔细冲洗厩、窝。爬虫类、水生动物和野生动物的饲养房舍应按动物种类灵活掌握。

(3)笼架与笼盒卫生管理:国外实行笼架与笼盒整套置换法,即将清洗与消毒过的一套笼盒与笼架推入动物房,将小型动物置入清洁的笼盒内;肮脏的笼架与笼盒推到清洗消毒房内用清洗机进行清洗。如实验动物场不备有上述设备,至少要有与使用笼盒等量的周转笼,以便更换洗涤。

在清洗消毒房内首先将笼盒里的旧垫料清除,浸入83℃以上的热水中10分钟,使污物软化,移入混有洗涤剂的温水池中彻底洗净四壁及底部,再用自来水仔细冲洗,将洗涤剂完全除去。应当注意,如做过病原菌感染试验的笼盒,必须先进行消毒,然后才能清洗,笼盒上不应残留任何清洁剂或消毒剂的痕迹,以免影响实验动物健康与试验结果,笼盒至少每周更换1次。

(4)饮水瓶、料斗、饲槽等附属设备卫生管理:在使用前必须消毒,定期更换清洗,至少每周进行1次。户外饲养的动物,最好在运动场顶部架设铁丝网,以免飞禽与野生动物侵入饲槽。每周至少将槽内残余饲料饲草清除1次,用消毒药消毒饲槽内外,尤其注意四个底角,最后用清水清洗干净备用。

(5)工作人员的清洁卫生管理:凡进入动物饲养区的职工,必须根据动物的级别按规定洗手或洗澡,消毒手臂,穿戴工作衣帽与胶靴、防护手套等。衣着必须整洁,定期清洗消毒。

120.如何处理实验动物尸体?

动物尸体是实验动物设施产生的主要废弃物之一。动物房舍中必须设置容量充足的冷藏设备以暂时贮存尸体。无感染病原微生物或放射性物质的动物尸体,可以直接做掩埋处理或焚烧,感染性的动物尸体应该用装载生物危害物质的塑胶袋妥善包装,经蒸汽高温高压灭菌后,再以一般处理无害性动物尸体的方法处理,如置入冷冻库冷冻保存。尸体由冷冻库取出后需先解冻再予焚烧,以避免燃烧不完全及浪费燃料。解冻时亦需在适当的场所,以避免解冻水的污染。放射性动物尸体,应以装载放射性物质的塑胶袋妥善包装,利用专用烘箱,以60~70℃将尸体水分烘干,为避免烘干过程产生恶臭,可利用微波炉加热使水分分离。经干燥后的动物尸体可按废弃放射性材料处理方法处理。

动物尸体解剖室是产生危害性物质来源处之一。组织固定液(如福尔马林)和动物身上的病原微生物(如LCMV、结核杆菌或其他人类的病原菌)如果没有适当的防护措施,不但会直接危害工作人员,亦可能泄漏出污染环境,所以尸体解剖室需设置负压式解剖台。排气亦需经过滤处理去除微生物或化学物。各种有机废液以适当容器回收,在动物房舍内其他的实验室如组织病理室、血液生化室、微生物室等,情况相同。

121.实验动物设施与实验动物微生物分类等级有何关系?

实验动物环境类型,分为普通环境、屏障环境、隔离环境;按实验动物微生物控制分类,分为普通级动物、清洁级动物、SPF级动物、无菌级动物。它们之间的饲养、实验的关系是:普通级动物饲育实验均要在普通环境中;清洁级动物、SPF级动物饲育、实验均要在屏障环境中;无菌级动物(包括悉生动物)的饲育、实验均要在隔离环境中进行。

122.何谓实验动物静态和动态设施?

无动物饲养状况下的设施称为静态设施,而有动物饲养的设施则叫做动态设施。动态监测是有时间连续性的,其监测的结果对指导环境调控、确保环境控制有决定意义。

环境指标中,惟一只有静态监测特性的指标是空气洁净度及微生物落下菌,因为它们的监测是在设施投付使用前或在使用中通过对进风口的监测完成的,不受动物有无的干扰。

环境监测的其他指标除氨气是动态的,其余都是具有静态和动态两重含义的指标。我国对实验动物设施采取许可证管理办法,申请获得许可证时,必定通过国家指定环境监测中心的监测,并出示环境监测达标证明。此外,在不定期的抽检中,也会对有动物状况下某一时刻的环境状况进行环境监测。不言而喻,这种环境检测是对未使用设施的环境控制能力的检测和某一固定时刻的不具时间连贯性的监测,因此不是完全含义上的动态监测。依据这种监测结果,实际上并不能完全证明动态下设施环境控制的可靠性。

动态环境监测需要对全年进行按季节变化和以实际饲养状况改变为准绳的规律,间断或连续监测。有全自动环境控制体系的设施可以较好地解决这一问题。否则就要先把各项环境指标的具有代表性测点通过比较监测确定下来,并长期在测点进行动态监测,指导环境调控。可见自检的动态监测和国家指定的环境监测的有机配合才能保证达到环境控制的要求。

123.实验动物环境监测的重要性与目的是什么?

对新建或改建的实验动物和动物实验设施,在启用前必须进行环境检测。所有环境指标均符合国家标准,方可投入使用。如不符合国家标准,将会严重影响实验动物微生物学质量。在设施使用过程中,监测实验动物生长发育的环境条件是否维持在适宜状态,更是至关重要。因此,实验动物的环境监测与遗传监测、营养监测、微生物监测一样,是保证实验动物质量的基本手段。

实验动物环境监测有两个目的:一是了解设施内环境特性,从而可评价其功能,证实环境控制的程度;二是了解设施内环境是否持续合格,通过及时调控,从而保障设施的正常运行。中华人民共和国国家标准GB149252001“实验动物环境及设施”是我国实验动物环境测量的标准。

124.开展实验动物环境设施检测应注意哪些事项?

(1)对实验动物环境设施检测,应配备尘埃粒子计数器、落下菌采样器、恒温培养箱、风速仪、照度计、温湿度计、声级仪、压差计等检测仪器,监测仪器的种类、数量及各种参数,应能满足实验动物设施技术指标检测、复验的需要。仪器的量程、精度与分辨率应符合设施检测指标要求,并按计量部门的要求管理和使用。

(2)检测人员应经过相关技术培训,并熟悉所使用仪器的构造、性能和使用方法,未掌握者不得开展检测工作,要严格按规定进入设施内检测。

125.实验动物环境设施申请检测程序与内容有哪些?

(1)实验动物环境设施内环境技术指标检测一般要求为静态状态检测,即设施内没有动物,如有动物为动态状态检测,动态状态检测、悬浮粒子、落下菌不在检测范围内。

(2)检测程序与内容:如图35。

126.国家标准(GB149252001)中实验动物环境设施技术指标有哪些?

(1)实验动物繁育、生产设施(生产型)环境指标(静态):如表34。

一般采用全新风,保证动物室有足够的新鲜空气,如果先期去除了粉尘颗粒物和有毒有害气体,不排除使用循环空气的可能,但再循环空气仅限于同一单元,新鲜空气不得少于50%,并保证供风的温、湿度参数单走廊设施必须保证饲育室、实验室压强最高(2)动物实验实施(使用型)环境指标(静态):如表35。

一般采用全新风,保证动物室有足够的新鲜空气,如果先期去除了粉尘颗粒物和有毒有害气体,不排除使用循环空气的可能,但再循环空气应取自于无污染区域或同一单元,新鲜空气不得少于50%,并保证供风的温、湿度参数单走廊设施必须保证饲育室、实验室压强最高此处动物实验设备系指动物饲养和实验时,保障动物所处的局部环境应达到本环境指标的设备127.什么是标准化操作规程(SOP)?

SOP是标准化操作规程(standardoperatingprocedures)的简称,通常是指常规实验室操作要求如何进行,而以书面文件制订的规程,对于书面文件制定的规程要讲究可操作性、实用性。SOP应根据技术使用部门的实际情况,以及条件、具体工作内容而制订,SOP操作规程的数量没有限制,但求质量,主要看它的可操作性如何。制订各级别实验动物生产、使用的SOP范围,应考虑到环境管理、动物生产、试验管理、原始记录等方面的内容。

128.实验动物普通环境使用和管理的SOP主要有哪些内容?

(1)环境管理:①人员管理;②卫生管理;③消毒管理;④防虫、防野鼠管理;⑤垫料管理;⑥饮水管理;⑦饲料管理;⑧动物处理管理。

(2)动物管理:生产、动物实验及动物检疫的管理。

(3)原始记录:①详细记录环境管理、动物每天的现象;②原始记录每天应有1人记录、1人复核;③原始记录中如有错误的地方不得随意涂改,记录如有相同地方,不能用“-”

等方式表示;④原始记录建立档案盒,有专人负责,在技术操作完成后一定时间内进行处理。

129.实验动物屏障环境使用和管理的SOP主要有哪些内容?

①人员管理;②物品垫料饲料、饮水、笼具、器械等进出、消毒、灭菌管理;③设施内空气、消毒、灭菌管理;④空调、通风、灭菌设备维护管理。

动物类管理与原始记录的要求同普通环境。

130.实验动物隔离环境使用和管理的SOP主要有哪些内容?

主要包括笼器具的检漏、组装,动物和物品在笼器具间的灭菌、传送,操作步骤中的管理,内环境微生物、寄生虫控制监测等主要内容;动物管理与原始记录同普通环境。

131.感染性动物实验设施管理的SOP有哪些主要内容?

感染性动物实验设施管理的SOP重点是建立生物安全防护SOP,其内容主要有建立一般管理SOP、特殊管理SOP、安全设备SOP、动物实验SOP。

132.实验动物笼器具有哪几种?

实验动物笼器具构造上分箱型、金属网型、格子型等。

常用笼器具类型有下列几种:

(1)定型式(冲压式):笼底为板底式,顶部加带网孔的盖子,可给料、给水,适用于小啮齿类动物。

(2)带承粪盘(板)的笼子:笼底为金属网或格子型底板,动物排泄物可通过底板上的网孔落于下面的承粪盘(板)上。可用于饲养大鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬、猫、猴,门开于前面,笼内或侧壁放置加料器及饮水器。

(3)栅栏型或围网型笼:用金属网或条围起来的大笼子,底部可能直接落于地面,用于大动物或作为养犬、猫、猴的笼子。

除了饲养用的笼具,还有很多具有其他功能的笼具,如具有运输、保定、微生物控制功能的笼具:

(1)运输笼:专门用于动物的运输,其特点是保证动物运输途中的安全,满足动物微生物控制要求。小动物运输笼多不作二次重复运用,可用纸板、塑料、木材和金属制成,但多用纸质运输笼。大动物则多采用金属护栏结构,良好的运输笼或用于长途运输的常带有很好的环境温度、湿度保障系统。

(2)挤压笼:对于大动物如猴,进行动物实验取样或正常健康检查常需保定、挤压笼,它带有一个可移动固定的特殊围护结构,可把动物挤至笼的一边使其不能转身和伤害工作人员。

(3)代谢笼:一种在笼底设置可将粪尿分隔并分别取出的笼子,可满足代谢研究的需要。

(4)透明隔离箱盒:在经过特殊加工的透明塑料箱盒上,固定有特殊过滤器材制成的隔离帽。隔离帽有助于控制微生物污染,可以做到笼间隔离。日常操作需在净化工作台上进行,平时放于笼架上或层流架上。

133.实验动物笼器具制造的材料主要有哪些?有何特点?

用于制造笼具的材料主要是不锈钢材及塑料。金属笼箱,通风良好,笼内温、湿度与室内环境一致,便于观察,但劳动强度大,管理较困难。塑料笼箱,易清洗消毒,管理方便,但大多数材料耐热性不够。聚碳酸酯材料耐热性较好,且透明便于观察,目前被普遍用于定型式笼具制造。

134.何谓实验动物普通笼器具?何谓净化笼器具?

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