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第4章 实验动物质量控制(1)

35.何谓实验动物标准化?

实验动物标准化由实验动物生产条件的标准化、实验动物质量的标准化、动物实验条件的标准化以及与之相适应的饲养管理规范化和动物实验规范化几个部分组成。只有具备了标准化的生产条件,对实验动物进行人工定向培育,并严格进行遗传学和微生物学控制,严格执行饲养管理标准操作规程,才能生产出标准化的实验动物;只有具备了标准化的实验动物和标准化的动物实验条件,执行标准实验操作规程,才有可能得出可靠的实验结果;只有实验结果准确、可靠、可重复,实验研究才有价值、有意义。

36.国家实验动物有几大控制标准?

国家实验动物标准分为实验动物微生物学等级及监测、实验动物寄生虫学等级及监测、哺乳类实验动物的遗传质量控制、实验动物配合饲料、实验动物环境及设施五大控制标准。

37.哺乳类实验动物的遗传分为哪几类?

根据遗传特点的不同,哺乳类实验动物分为近交系、封闭群和杂交群三类。

38.为什么要对实验动物进行遗传监测?

遗传监测,就是通过形态学、免疫学和生物化学等方法来测定动物品系的遗传组成是否发生变化。尽管在实验动物的培育、维持和生产过程中采取了许多严格的控制手段,但还是存在许多导致动物发生遗传变异的因素。遗传上的变化导致实验动物某些原有特性的改变,影响实验研究结果,所以进行实验动物质量的遗传监测就显得尤为重要。

对于近交系来说,发生遗传变异的主要原因,有遗传污染,遗传漂变和突变等。在实践中,遗传污染是指最常见的实验动物管理事故,通常是由于其他品系动物与本品系动物发生交配所致。遗传漂变是指一个品系动物基因型在饲养过程中可能发生的随机改变,这种改变多由于近交系动物残留杂合基因分离,造成了亚系的形成。突变是由于动物基因组中某个核苷酸残基的置换、缺失或插入,引起一个等位基因的改变。因此在必须继续进行近亲繁殖时,随时要注意是否有新变异发生。即使在已经建立起来的近交系中,也必须严加注意。

这就需要使用遗传检测的方法对繁殖保存的近交系动物进行定期的测定。

39.何谓遗传与变异?

实验动物在繁殖过程中,产生与自己相似的个体,以保证物种世代延续,这种子代在形态、生理、生化等方面的特征与亲代的一致性,称为遗传。遗传现象是生物界的一个普遍现象。但在实践中,若仔细地检查子代的各方面特性,就可以发现或多或少在某些方面与亲代不一样,子代的个体间也存在着差异。最常见的如子代的尾长、毛色与它们双亲不一致;正常的健康群中出现的生理缺陷,如小耳、白化、无胸腺等病态。这种子代与亲代的不一致性,称为变异。

40.何谓孟德尔遗传的基本定律?

孟德尔遗传的基本定律是指分离定律和自由组合定律。分离定律是指控制性状的一对基因不论在纯合或杂交状态时,每个基因都保持各自的独立性,在形成性细胞时,基因分离各自分配到各个性细胞中。自由组合定律是指两对(或多对)相对性状遗传,形成性细胞时,每对性状基因的分离与其他性状的基因分离无关,不同性状的基因组合在一个性细胞中完全是随机的,两性细胞结合成合子,基因型的组合也是随机的。

41.什么是基因连锁定位图和基因物理图?有何意义?

基因连锁定位图是根据测定实验的结果计算互换率,确定三个基因在染色体上的位置,并用同样的方法把第4个,第5个……的基因位点测定出来,安放在染色体图上,最终绘制成的遗传图。基因连锁定位图中,基因在染色体上呈直线排列,1%重组率即cM作为基因相对位置或遗传距离单位。

基因物理图是在DNA水平上,以碱基对即bp为单位,表示基因在染色体上的实际距离的遗传图。通常基因物理图由DNA的限制酶片段或克隆的DNA片段有序排列而成。

基因连锁遗传图回答了有关基因在染色体上分布的许多问题,如基因的相对位置和方向,它是否紧靠着丝粒?两基因间的相对距离是多少?具有相关功能的基因是成群地还是分散地分布于染色体中?调节子是紧紧靠近它们所调节的基因还是位于基因组的什么地方?由内源性病毒控制的基因,它们具有一个稳定的位置,还是位置不定、能否在基因组中移动?回答了这类问题就能增强我们对基因功能及相关染色体结构的了解。

基因物理图的出现,使生命科学进入以研究人类功能基因为主的后基因组时代,在这一时代里,以小鼠作为模式化生物,采用转基因、基因剔除、ENU诱变等技术建立各种人类疾病的小鼠模型,从整体上研究基因的功能。通过这些研究,对物种间进化关系的进一步洞察和不同物种基因图的比较,可以提高我们对自身的认识,为研究生命现象的本质,探索衰老、癌症、遗传性疾病和各种疾病的病因、分子学机理,最终为人类的健康长寿提供依据、提供服务。

42.何谓突变?

遗传物质发生可遗传的改变就是突变。突变可分为染色体畸变和基因突变两类,根据发生突变的原因又分为自然突变和人工诱变两类。在动物只有性细胞发生突变时才能传给后代,而体细胞发生突变一般不影响个体的整体或性细胞,因此不会传给后代。

43.何谓近交系数?

近交系数是表示动物近交程度的一个指数,对于群体,我们假定一个大群体实行随机交配,则某一后代在亲代中随机取得一对同源等位基因的概率就是这一个体的近交系数,它也是群体全部后代的平均近交系数,可以用这一概率作为群体的近交系数。

44.近交系动物的定义是什么?如何命名?

近交系是指至少连续20代的同胞兄妹交配培育而成,品系内所有个体都可追溯到起源于第20代或后代数的一对共同祖先。经连续20代以上亲代与子代交配与全同胞兄妹交配有等同效果。

命名:近交系一般以大写英文字母命名,亦可以用大写英文字母加阿拉伯字母命名,符号应尽量简短。如A系、TA1系等。近交系的近交代数用大写英文字母F表示。例如当一个近交系的近交代数为87代时,写成(F87)。

45.亚系的定义是什么?怎样形成的?如何命名?

亚系是指一个近交系内的各个分支的动物之间,已经发现或十分可能存在遗传差异。通常下述三种情况会发生亚系分化:

(1)在兄妹交配代数达40代以前形成的分支(即分支发生于F20到F40之间)。

(2)一个分支与其他分支分开繁殖超过100代。

(3)已发现一个分支与其他分支存在遗传差异,产生这种差异的原因可能是残留杂合、突变或遗传污染。

命名:亚系的命名方法是在原品系的名称后加一道斜线,斜线后标明亚系的符号。亚系的符号可以是以下三种:①数字,如DBA/1、DBA/2等;②培育或产生亚系单位或人的缩写英文名称,第一个字母用大写,以后的字母用小写,如:A/He,表示A近交系的Heston亚系;③当一个保持者保持的一个近交系具有两个以上的亚系时,可在数字后再加保持者的缩写英文名称来表示亚系,如:C57BL/6J、C57BL/10J,分别表示由美国杰克逊研究所保持的C57BL近交系的两个亚系。

46.重组近交系的定义是什么?如何命名?是怎样繁殖的?

重组近交系指由两个近交系杂交后,经连续20代以上兄妹交配育成的近交系。

命名:由两个亲代近交系的缩写名称中间加大写英文字母X命名。由相同双亲交配育成的一组近交系用阿拉伯数字予以区分。例如:由BALB/c与C57BL两个近交系杂交育成的一组重组近交系,分别命名为CXB1、CXB2、……繁殖:在两个近交系杂交生育杂种一代后,杂种一代互交生育杂种二代,从杂种二代中随机选择个体配对,连续进行20代以上的兄妹交配,可培育出重组近交系动物。通常从多对杂种二代中平行培育出一系列重组近交系动物。

47.同源突变近交系的定义是什么?如何命名?

两个近交系,除了在一个指明位点等位基因不同外,其他遗传基因全部相同,简称同源突变系。同源突变系一般皆由近交系发生基因突变而形成。

命名:由发生突变的近交系名称后加突变基因符号(用英文斜体印刷体)组成,两者之间以连接号分开;当突变基因必须以杂合子形式保持时,用“+”号代表野生型基因,如:A/Fa~+/c。

48.同源导入近交系(同类近交系)的定义是什么?如何命名?

通过杂交互交或回交等方式将一个基因导入到近交系中,由此形成的一个新的近交系与原来的近交系只是在一个很小的染色体片段上的基因不同,称为同源导入近交系(同类近交系),简称同源导入系(同类系)。

命名:同源导入系名称由以下三部分组成:

(1)接受导入基因的近交系名称。

(2)提供导入基因的近交系的缩写名称,并与a项之间用英文句号分开。

(3)导入基因的符号(用英文斜体),与b项之间以连字符分开。

例如:B10.129H12b,表示该同源导入近交系的遗传背景为C57BL/10sn(=B10),导入B10的基因为H12b,基因提供者为129/J近交系。

49.转基因动物的定义是什么?如何命名?

转基因动物是指通过实验手段将新的遗传物质导入到动物胚细胞中,并能稳定遗传,由此获得的动物称为转基因动物。

转基因动物的命名遵循以下原则:

一个转基因符号由以下三部分组成,均以罗马字体表示:TgX(YYYYYY)#####Zzz。

其中各部分符号表示含意为:TgX=方式(mode);(YYYYYY)=插入片段标示(insertdesignation);#####=实验室指定序号(laboratoryassignednumber);Zzz=实验室注册代号(laboratorycode)。

举例:C57BL/6JTgN(CD8Ge)23Jwg,表示来源于美国杰克逊研究所(J)的C57BL/6品系小鼠被转入了CD8基因组(Ge);转基因工作在JonW.Gordon(Jwg)实验室完成,这个小鼠是该实验室通过一系列显微注射后得到的序号为23的小鼠。

如果转基因动物的遗传背景是由不同的近交系或远交群之间混合而成时,则该转基因符号应不使用动物品系或种群的名称。

转基因符号的缩写:转基因符号可以缩写,即去掉插入片段标示部分,例如TgN(GPDHIm)1Bir可缩写为TgN1Bir。一般在文章中第一次出现时使用全称,以后再出现时可使用缩写名称。

50.近交系动物具有哪些特性?

(1)基因位点的纯合性:近交品系动物中任何一个基因位点上纯合子的概率高达99%,因而能繁殖出完全一致的纯合子,品系内个体相互交配不会出现形状分离。

(2)遗传组成的同源性:品系内所有动物个体都可追溯到一对共同祖先,也就是说同一个品系内每只动物的个体在遗传上都是同源的,基因型完全一致。

(3)表型一致性:由于基因型一致,近交系内个体的表型也是相同的,特别是那些可遗传的生物学特征。如毛色、组织型、生化同工酶以及行态学特征等。

(4)长期遗传稳定性:近交系动物在遗传上具有高度稳定性,虽然残留杂合会导致个体遗传变异,但这种概率非常小。

(5)遗传特征的可分辨性:每个近交系都有各自的遗传概貌(包括毛色基因、生化基因等),选用适当的遗传监测方法,即可分辨各个近交系。

(6)遗传组成的特定性:每个近交系都有自己的遗传组成和独自的生物学特性,经过近交培育之后,每个品系从物种的整个基因库中只能获取极少部分的基因,这部分基因构成了品系的遗传组成,因此,每个品系在遗传组成上是独一无二的,具有独特的表型特征。

(7)分布的广泛性:近交系动物任何一个个体均携带该品系全部基因库,引种非常方便,便于在不同国家、地区建立几乎完全相同的标准近交系,使各国研究结果具有可比性。

(8)背景资料和数据较为完善:近交系动物在培育和保种的过程中都有详细记录,加之这些动物分布广泛,经常使用,已有相当数量的文献记载着各个品系的生物学特征,这些基本数据为设计新的实验和解释实验结果提供了便利条件。

51.封闭群动物的定义是什么?如何命名?

封闭群亦称远交群,指以非近亲交配方式进行繁殖生产的一个实验动物种群,在不从其外部引入新个体的条件下,至少连续繁殖4代以上。

命名:封闭群动物由2~4个大写英文字母命名,种群名称前标明保持者的英文缩写名称,第一个字母需大写,后面的字母小写,一般不超过4个字母。保持者与种群名称之间用冒号分开。例如:N:NIH表示由美国国立卫生研究院(N)保持的NIH封闭群小鼠。某些命名较早,又广为人知的封闭群动物,名称与上述规则不一致时,仍可沿用其原来的名称。

52.封闭群动物培育技术应遵循哪些原则?

引种原则:①作为原种的封闭群动物必须遗传背景明确、来源清楚,有较完整的资料(包括种群名称、来源、遗传基因特点和主要生物学特性);②为保持封闭群动物的遗传异质性及基因多态性,引种动物数量要足够多,小型啮齿类封闭群动物引种数目一般不能少于25对。

繁殖原则:为保持封闭群动物的遗传基因稳定,封闭群应足够大,并尽量避免近亲交配。根据封闭群的大小,选用循环交配法等方法进行繁殖,以确保每代近交系数上升不超过1%。

封闭群中每代交配的雄种动物数目为10~25只时,一般采用最佳避免近交法,也可采用循环交配法。

当封闭群中每代交配的雄种动物数目为26~100只时,一般采用循环交配法,也可采用最佳避免近交法。封闭群中每代交配的雄种动物数目多为100只时,一般采用随机交配法,也可采用循环交配法。

53.封闭群动物主要有哪些特性?

封闭群动物具有较强的繁殖力和生活力,表现为每胎产仔多、胎间隔短、仔鼠死亡率低、生长快、成熟早、对疾病抵抗力强、寿命长,加之饲养繁殖时无需详细记录谱系,容易生产,成本低,可大量供应,因而广泛应用于预试验、教学和一般实验中。封闭群动物具有类似于人类群体遗传异质性的遗传组成,因此在人类遗传研究、药物筛选和毒性试验等方面起着不可替代的作用。

54.杂交群动物的定义是什么?如何命名?

杂交群动物是由不同品系或种群之间杂交产生的后代。

杂交群应按以下方式命名:雌性亲代名称在前,雄性亲代名称居后,二者之间以大写英文字母“X”相连表示杂交。将以上部分用括号括起,再在其后标明杂交的代数(如F1、F2等)。对品系或种群的名称可使用通用的缩写名称。

例如:(C57BL/6XDBA/2)F1=B6D2F1(NMRIXLAC)F2再在其后标明杂交的代数,对品系或种群的名称可使用通用的缩写名称。

55.杂交群动物如何培育F1代?

杂交群动物的生产是比较简单的,采用两个近交系进行杂交而得。将两个基因型不同的近交品系纯合子作为亲代,互相交配所产生的子一代即可形成F1代杂交群动物。

(1)杂交组合的选择:根据研究需要和各个品系特性选择杂交组合,例如C57BL/6品系的雌鼠与C3H品系的雄鼠交配产生BC3F1小鼠,该F1小鼠是乳腺癌低发病者。如果用C3H雌鼠与C57B/L6雄鼠杂交,其F1代属乳腺癌高发小鼠。建立F1代小鼠一定要通过不同杂交组合的对比观察,从中选出最理想的杂交品系组合。

(2)交配方法:繁殖杂交F1小鼠的目的,是为了能在一定时间内,提供较大量的遗传均一的实验动物,因此交配方法最好采用循环交配或定期交配进行生产。这种交配方法,可使90%~95%的无特定SPF小鼠在同居后第一个发情期怀孕,因此每胎生产日期比较集中,可成批提供数量较多、体重和年龄较为接近的F1代小鼠。

56.杂交群动物主要有哪些特性?

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